小学、初中、高中各种试卷真题知识归纳文案合同PPT等免费下载www.doc985.com热点微练22PCR技术的应用（尖子生特训）（时间：10分钟）1.（2022·河北保定调研）穿梭载体是一类具有两种不同复制原点、能在两种不同的生物体（物种不同）中复制的载体，一般在原核生物和真核生物中都能复制和表达，如Ti质粒和哺乳动物表达质粒pMT2。回答下列问题。（1）用PCR技术从基因文库中获取并扩增目的基因时，需要加入人工合成的作为引物；PCR反应体系中需加入的原料是______________________________。（2）若要构建一个穿梭质粒，使其能够在大肠杆菌中大量复制，且能在哺乳动物细胞中表达，质粒上除含启动子、终止子、多个限制酶酶切位点和标记基因外，还需要有的复制原点。（3）如图为某种哺乳动物穿梭质粒示意图，现欲使用该质粒表达人生长激素，但人生长激素基因所在的DNA片段上不含图中限制酶识别序列。为使PCR扩增的人生长激素基因定向插入该质粒，扩增的人生长激素基因两端设计的序列应含有（填图中的限制酶名称）的切割位点。注：图中限制酶的识别序列及切割形成的黏性末端均不相同（4）将该穿梭质粒、目的基因混合后形成的重组质粒与感受态的大肠杆菌细胞混合，完成转化过程，再从培养的大肠杆菌细胞中提取质粒，可获得大量该质粒。在含卡那霉素的培养基中能够生长的大肠杆菌细胞中（填“一定”或“不一定”）含有目的基因，原因是_____________________________________。答案（1）一小段单链DNA4种脱氧核苷酸（2）大肠杆菌和哺乳动物细胞（3）NdeⅠ和BamHⅠ（4）不一定若大肠杆菌细胞中导入的是未携带目的基因的（穿梭）质粒，大肠杆菌细胞也能在含卡那霉素的培养基中生长（合理即可）解析（1）在PCR反应体系中，需加入一小段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物；需加入四种脱氧核苷酸作为合成DNA的原料。（2）基因表达载体的组成成分包括目的基因、启动子、终止子、复制原点和标小学、初中、高中各种试卷真题知识归纳文案合同PPT等免费下载www.doc985.com小学、初中、高中各种试卷真题知识归纳文案合同PPT等免费下载www.doc985.com记基因等。穿梭载体具有两种不同复制原点，要构建一个能够在大肠杆菌中大量复制，且能在哺乳动物细胞中表达的穿梭质粒，需要加入大肠杆菌和哺乳动物细胞的复制原点。（3）如果在哺乳动物的穿梭质粒中插入人生长激素基因，基因表达载体中目的基因的上游为启动子，下游为终止子。题图中启动子和终止子之间有限制酶NdeⅠ、XbaⅠ、BamHⅠ的识别序列，但是，终止子下游，还有一段限制酶XbaⅠ的识别序列，所以为使PCR扩增的人生长激素基因定向插入该质粒，扩增的人生长激素基因两端设计的序列应含有NdeⅠ和BamHⅠ的切割位点。（4）导入大肠杆菌细胞的有可能是没有携带目的基因的穿梭质粒，该穿梭质粒上含有卡那霉素抗性基因，导入未携带目的基因的穿梭质粒的大肠杆菌也可在含有卡那霉素的培养基中生长，所以在含卡那霉素的培养基中能够生长的大肠杆菌细胞中不一定含有目的基因。2.（2022·山东烟台调研）如图为转基因抗病毒马铃薯培育过程图，请据图回答有关问题：（1）PCR技术利用的基本原理是。利用该技术扩增目标DNA片段（子链的延伸方向从5′－端→3′－端），应选择图中的引物（填字母）与模板DNA结合。（2）PCR体系经过n次循环可使DNA数量得到约2n倍的扩增。若反应体系加入m个靶DNA，经3次循环后图中所示目标DNA片段所占的比例为。（3）在构建基因表达载体时，常用两种不同的限制酶切割目的基因和质料，获得不同的黏性末端，其主要目的是。（4）重组细胞经过G、H过程成功培育出了转基因抗病毒马铃薯植株，此过程涉及的细胞工程技术是，该技术广泛应用于、等育种过程。（5）研究表明，转基因植物可以通过花粉将外源基因扩散到其他植物，从而对生态环境造成潜在的危害。因此，科学家设法将目的基因整合到受体细胞的（填“细胞核”或“叶绿体”）基因组中，以防止目的基因通过花粉向其他植物扩散。答案（1）DNA半保留复制B和E（2）（3）防止目的基因和质粒自身环化及反向连接（4）植物组织培养技术基因工程育种单倍体育种小学、初中、高...